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  近日，最新發(fā)表在著名國際期刊《Veterinary Microbiology》上的一項研究發(fā)現(xiàn)，非洲豬瘟病毒在水蛭體內(nèi)存活可達140天。

  已有研究表明，非洲豬瘟病毒(ASFV)可通過水源傳播。截止目前，水被ASFV污染的源頭仍不清楚，其中一個可能的因素是感染豬的糞便和尿液。然而，在沒有合適寄生物的情況下，ASFV在水中存活時間一般只有數(shù)天，是不可能在水中長期存在的。因此，尋找可以攜帶和傳播非洲豬瘟病毒的水生生物顯得非常必要。在自然環(huán)境中，水蛭是細(xì)菌、病毒、寄生蟲的重要宿主。早在1913年，Boynton等已發(fā)現(xiàn)它在牛瘟的傳播中具有重要作用。后續(xù)研究也發(fā)現(xiàn)，水蛭是動物病毒的跨宿主傳播的載體之一。該研究對水蛭攜帶和分泌ASFV的能力進行了檢測，并對水蛭分泌的ASFV的感染能力進行了分析。

  實驗分組

  將水蛭分為兩組。第一組的96條水蛭進行ASFV的攜帶研究。在豬感染ASFV 6天左右，讓水蛭在感染豬的下腹部吸食血液，因為這個時期血液中的病毒載量相對較高。通過人為摘除，控制水蛭的吸食時間為10 min左右。同時用10條吸食過人血液的水蛭作為實驗對照。第二組的96條水蛭用來進行ASFV的培養(yǎng)研究。將感染豬的脾臟提取物進行稀釋后，以4.0 lg HADU??/ml ASFV的濃度對該組水蛭進行飼喂。同時用10條未進食的水蛭作為實驗對照。模擬夏季的環(huán)境溫度，該研究中水蛭的培養(yǎng)條件為22℃–25℃ 80天，26℃–32℃ 60天，24℃–26℃ 60天。

  實驗結(jié)果

  通過檢測水蛭的體液分泌物，該研究確認(rèn)了兩組的水蛭均攜帶了ASFV。在無水蛭的水環(huán)境對照中，HADU檢測結(jié)果顯示，ASFV在培養(yǎng)液中的失活與溫度密切相關(guān)。30℃避光條件下，ASFV可至少存活12-14天，最長可達30-35天 (1 A)。PCR結(jié)果顯示，ASFV DNA在水環(huán)境中可存在至少3-5周(1B)。

  在水蛭實驗組，HADU結(jié)果顯示，直到160天，有50%的水蛭體內(nèi)仍可檢測到ASFV(表2)。HADU結(jié)果顯示，我們發(fā)現(xiàn)實驗開始階段血液吸食組水蛭體內(nèi)的病毒含量高于脾臟提取物培養(yǎng)組。60-80天后，血液吸食組水蛭體內(nèi)的病毒含量開始下降，但一直持續(xù)至160天左右(1C)。PCR方法與HADU方法的結(jié)果基本一致，ASFV DNA在血液吸食組水蛭體內(nèi)可存在150-160天，在脾臟提取物培養(yǎng)組水蛭體內(nèi)可存在140-150天(1D)。

  在水蛭實驗組的培養(yǎng)液中，雖然ASFV滴度隨培養(yǎng)時間延長有所下降，但直到實驗結(jié)束，通過HADU和PCR方法均能檢測到ASFV的存在(1E和1F)。另外，結(jié)果顯示培養(yǎng)液沉淀物中的病毒拷貝數(shù)要明顯高于培養(yǎng)液。

  為了測試水蛭攜帶ASFV的感染能力，培養(yǎng)130-160天后，該研究用水蛭實驗組的培養(yǎng)液、水蛭提取物的10倍稀釋液對豬原代肺泡巨噬細(xì)胞進行感染。HADU和PCR結(jié)果均顯示，接種后24-48 h病毒滴度明顯增加。

  該研究進一步測試了水蛭實驗組攜帶的ASFV是否對豬具有感染能力，結(jié)果表明水蛭攜帶的ASFV通過口服途徑感染豬是可能的，但是這種現(xiàn)象不能被有規(guī)律的重復(fù)，特別是在實驗的后期階段。從口服感染到發(fā)病，豬的潛伏期為12-15天，這與臨床數(shù)據(jù)非常相似。

  該研究表明，在相對比較高的溫度條件下，水蛭體內(nèi)的ASFV可存活達140天?？梢酝茰y，如果在相對低的溫度條件下，該存活期可能會更長。根據(jù)這個發(fā)現(xiàn)，我們認(rèn)為水蛭也是ASF流行的一個重要宿主。該發(fā)現(xiàn)對于放養(yǎng)豬和野豬的ASF季節(jié)性流行的原因，也提供了一個合理解釋。目前，水蛭可使病毒長時間保持感染力的原因還不清楚，Al-Khleif等認(rèn)為水蛭體內(nèi)可能存在一些適合病毒生存的因子。病毒能夠在水蛭體內(nèi)存活并分泌到環(huán)境中，可能的原因是病毒能夠在水蛭的組織細(xì)胞、未消化的血液中復(fù)制，或者水蛭組織細(xì)胞具有長期保存病毒的能力，并緩慢釋放。然而，ASFV不太可能在水蛭攝取的血液中進行復(fù)制，因為兩組間的病毒滴度接近。水蛭生長的水中能檢測到ASFV，可能原因是它的分泌或排泄，該研究認(rèn)為水蛭可能在維持ASFV病毒活性方面具有重要作用。

  2018年8月3日，我國發(fā)現(xiàn)首例非洲豬瘟疫情，隨后很快傳播到全國大部分地區(qū)，已經(jīng)造成巨大的經(jīng)濟損失。由于缺乏安全有效的疫苗，目前控制該病的唯一方法是實行嚴(yán)格的生物安全措施。因此，對ASFV的傳播途徑進行深入研究，有助于提高生物安全防控意識，增強防控手段。水蛭作為多種細(xì)菌、病毒、寄生蟲的重要宿主，在疫病傳播中具有不可忽視的作用。筆者認(rèn)為，本研究關(guān)于水蛭可攜帶ASFV的發(fā)現(xiàn)，揭示了ASFV可在水中長期存在的一個重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，水源是ASFV跨區(qū)域傳播的一個重要因素，美國堪薩斯州立大學(xué)Niederwerder助理教授的研究小組發(fā)現(xiàn)，ASFV通過飲水引起感染的劑量很小，最低僅為100 TCID??。

  我國地域遼闊，地理環(huán)境復(fù)雜，物種種類多樣。已有相關(guān)數(shù)據(jù)表明，1959-2009年我國大陸的人體水蛭病病例數(shù)達1003例，主要分布于廣西、貴州、云南、福建、廣東、湖北、江西、浙江等15個省(區(qū))。目前雖然沒有發(fā)現(xiàn)水蛭與ASFV在我國迅速傳播的直接聯(lián)系，但根據(jù)該研究提供的數(shù)據(jù)，我們應(yīng)該提高警惕，重視養(yǎng)豬用水的凈化，同時加強周邊河流的監(jiān)管，禁止死豬入河，共同構(gòu)筑堅實的生物安全屏障。